病毒和類病毒顆粒?(VLPs)?因其獨特的結構性質備受研究者的青睞,特別是在有序結構的分級組裝和模板控制合成中發(fā)揮了重要作用。然而野生型VLPs較差的穩(wěn)定性限制了其廣泛應用。如何通過理性設計,通過改造VLPs基元,提高其組裝性能,構建穩(wěn)定的蛋白質納米結構亟待解決。
最近,中科院蘇州納米技術與納米仿生研究所的王強斌研究員在《Angewandte?Chemie》上發(fā)表了題為“Interfacially Bridging Covalent Network Yields Hyperstable and Ultralong Virus-based Fibers for Engineering Functional Materials”的文章。他們在煙草花葉病毒(TMV)自組裝過程中引入“Covalent Network”學術思想:通過在特定位置引入半胱氨酸突變,在TMV組裝成棒狀結構中成功構建了二硫鍵網絡,連接所有的TMV蛋白亞基,形成長達十幾微米的纖維結構,并具有良好的穩(wěn)定性。該工作為蛋白質自組裝調控及其應用拓展具有很好的啟發(fā)作用。
1、?結構設計
他們基于TMV蛋白結構,在橫向上,選取103位蘇氨酸突變?yōu)榘腚装彼?,連接相鄰亞基構成二聚體。在軸向上,選取74位丙氨酸突變?yōu)榘腚装彼幔⒃趯?0-54位分別構建半胱氨酸突變,使其組成巰基對,對比不同突變的組裝效率。結合橫向和軸向的二硫鍵,所有的TMV亞基都會被包含在所設計的共價網絡之中(圖1D)。
2、?組裝結果
在二價銅離子催化氧化下,構建成功的4個突變體蛋白展現出了不同的組裝性能。T103C-TMV-E50C-A74C全部組裝成無缺陷的剛性纖維。而V51C-A74C,K53C-A74C,P54C-A74C則會有存在TMV盤狀結構聚集,纖維存在缺口等現象。分析其原因,C50-C74之間的距離小于4 ?且并排朝向同一方向,有利于二硫鍵的形成。而其它突變體則有巰基對之間距離遠、朝向不利二硫鍵形成等問題,導致組裝效率下降。
3、?堿性條件下的組裝及結構的耐堿性
為了進一步探究在不同條件下的組裝行為,他們選取了組裝效率最高的T103C-TMV-E50C-A74C進行一系列測試。野生型的TMV需要在弱酸性,高鹽離子濃度條件下才能組裝成幾百納米長的棒狀結構,而T103C-TMV-E50C-A74C能夠在中性乃至堿性條件下形成十幾微米的纖維結構。該纖維能夠在pH高達13的強堿性條件下維持穩(wěn)定,并且在50℃水浴加熱后也沒有發(fā)生明顯的結構損壞。經改造的超長,超穩(wěn)定的TMV纖維結構展現出作為生物模板的巨大應用潛力。
以組裝好的TMV纖維為生物模板,他們在纖維表面原位合成了Pd-Pt合金材料。Pd-Pt納米顆粒在TMV纖維表面負載均勻,通過優(yōu)化負載比,Pd-Pt/TMV復合材料展現出了優(yōu)異的電催化活性。
綜上所述,作者通過理性設計,在蛋白界面間引入共價網絡,構建了超長、超穩(wěn)定的TMV纖維結構,為其它納米功能材料的合成提供良好的生物模板。這項研究提出了改造現有生物模板的新策略,同時為構建生物功能材料帶來了新的啟示。
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https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/ange.202008670